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        核酸(suān)的定量(liáng)是(shì)超微量分光光(guāng)度(dù)計使(shǐ)用頻(pín)率(shuài)zui高(gāo)的功能(néng)。可(kě)以(yǐ)定量溶(róng)於緩(huǎn)衝(chōng)液的寡核苷酸(suān)，單鏈，雙(shuāng)鏈DNA，以及(jí)RNA。核酸(suān)的zui高吸(xī)收(shōu)峰(fēng)的(dí)吸收(shōu)波長(cháng)260 nm。每(měi)種(zhǒng)核酸的(dí)分子構成(chéng)不(bù)一(yī)，因此(cǐ)其換算(suàn)係數(shù)不同。定(dìng)量(liáng)不(bù)同(tóng)類(lèi)型的核(hé)酸，事先(xiān)要選擇(zé)對應的(dí)係數。如(rú):1OD 的吸(xī)光值(zhí)分別相(xiāng)當於(yú)50μg/ml的(dí)dsDNA，37μg/ml的ssDNA，40μg/ml的RNA，30μg/ml的(dí)Olig。測試(shì)後的(dí)吸光(guāng)值經過上(shàng)述係數(shù)的換(huàn)算，從(cóng)而得(dé)出相(xiāng)應的(dí)樣品濃(nóng)度。測(cè)試前，選擇正確(què)的程序(xù)，輸入原液和(hé)稀(xī)釋(shì)液的體積(jī)，爾(ěr)後測(cè)試(shì)空(kōng)白液和樣(yàng)品液。然(rán)而(ér)，實(shí)驗(yàn)並非(fēi)一帆風順(shùn)。讀(dú)數不穩定可能(néng)是實(shí)驗(yàn)者頭(tóu)痛的問(wèn)題。靈敏度越高的(dí)儀器(qì)，表現(xiàn)出的(dí)吸(xī)光(guāng)值漂移(yí)越(yuè)大。

        事實上(shàng)，分光(guāng)光度(dù)計(jì)的(dí)設(shè)計原理(lǐ)和工作(zuò)原理(lǐ)，允(yǔn)許吸(xī)光(guāng)值在一定範(fàn)圍內變化，即儀器(qì)有(yǒu)一定的(dí)準(zhǔn)確度和(hé)精確(què)度(dù)。如斯達沃超(chāo)微(wēi)量分(fēn)光光度(dù)計的準確度≤1.0%(1A)。這樣多次測(cè)試(shì)的(dí)結(jié)果在均(jūn)值1.0%左(zuǒ)右(yòu)之(zhī)間(jiān)變(biàn)動，都是(shì)正常的(dí)。另(lìng)外，還(huán)需考(kǎo)慮(lǜ)核(hé)酸(suān)本身物(wù)化性(xìng)質(zhì)和(hé)溶解(jiě)核酸的緩衝液的(dí)pH值(zhí)，離子濃度等(děng):在測(cè)試(shì)時，離子(zǐ)濃(nóng)度(dù)太高，也會導致讀數(shù)漂移(yí)，因(yīn)此建議使(shǐ)用(yòng)pH值一(yī)定，離子濃度(dù)較(jiào)低的(dí)緩衝液，如TE，可大大(dà)穩(wěn)定讀數。樣(yàng)品的稀釋濃度同樣是不可忽視的因素(sù):由(yóu)於樣(yàng)品(pǐn)中(zhōng)不可避(bì)免(miǎn)存在(zài)一(yī)些(xiē)細小的顆(kē)粒(lì)，尤(yóu)其是(shì)核(hé)酸樣品。這些小顆(kē)粒(lì)的存在(zài)幹(gān)擾(rǎo)測試(shì)效(xiào)果。為(wéi)了zui大程(chéng)度減(jiǎn)少(shǎo)顆(kē)粒對(duì)測(cè)試結果的影響(xiǎng)，要求核酸(suān)吸光值(zhí)至(zhì)少大於0.1A，吸光值(zhí)在(zài)0.1-1.5A。在此範圍內，顆粒(lì)的(dí)幹擾相對(duì)較小，結(jié)果(guǒ)穩定(dìng)。從而意味(wèi)著樣品(pǐn)的濃度不(bù)能過(guò)低，或者過高(超過光度(dù)計的測試範(fàn)圍)。後(hòu)是操作因素(sù)，如(rú)混合要(yào)充(chōng)分，否則(zé)吸(xī)光值(zhí)太低(dī)，甚(shèn)至(zhì)出(chū)現負值;混(hùn)合液(yè)不(bù)能(néng)存(cún)在氣(qì)泡(pào)，空(kōng)白液(yè)無懸浮物，否則(zé)讀數漂(piāo)移劇烈(liè);必須(xū)使(shǐ)用(yòng)相(xiāng)同(tóng)的(dí)比(bǐ)色杯(bēi)測試空(kōng)白(bái)液和樣(yàng)品(pǐn)，否則濃度差(chà)異(yì)太(tài)大;換算係(xì)數和樣(yàng)品濃(nóng)度單位(wèi)選(xuǎn)擇一(yī)致(zhì);不(bù)能采用(yòng)窗(chuāng)口磨損的比(bǐ)色杯;樣品的(dí)體積(jī)必須(xū)達(dá)到(dào)比色杯要求(qiú)的(dí)小體積等(děng)多(duō)個操作事項(xiàng)。

         除(chú)了核酸(suān)濃(nóng)度，分光光(guāng)度計同(tóng)時(shí)顯示(shì)幾個非常重(zhòng)要(yào)的比(bǐ)值(zhí)表(biǎo)示樣(yàng)品的(dí)純(chún)度，如A260/A280的比值，用於評估(gū)樣(yàng)品的純度(dù)，因為(wéi)蛋(dàn)白的吸(xī)收峰(fēng)是280nm。純(chún)淨的樣品，比值大(dà)於1.8(DNA)或者2.0(RNA)。如果比值(zhí)低於1.8 或(huò)者(zhě)2.0，表示(shì)存在(zài)蛋白質(zhì)或者(zhě)酚(fēn)類(lèi)物(wù)質(zhì)的(dí)影響。A230表示樣品中(zhōng)存(cún)在(zài)一(yī)些(xiē)汙(wū)染物，如(rú)碳水(shuǐ)化(huà)合(hé)物(wù)，多(duō)肽，苯(běn)酚(fēn)等，較(jiào)純(chún)淨的核(hé)酸(suān)A260/A230的比(bǐ)值大於2.0。A320檢測(cè)溶液的混濁(zhuó)度(dù)和其他(tā)幹(gān)擾(rǎo)因子。純(chún)樣(yàng)品，A320一(yī)般(bān)是(shì)0。